عنوان                                                                                                               صفحه

مرور كلي بر اصول PCRو...................................................................................... 1

مقدمه............................................................................................................. 5

عواملي كه در ميزان موفقيت يك واكنش PCRموثرند.................................................. 6

غلظت واكنش‌گرها............................................................................................. 7

غلظت يونMg2+............................................................................................... 7

غلظت ساير يون ها........................................................................................... 8

غلظت پرايمرها................................................................................................. 11

غلظت DNAالگو (template DNA)و......................................................................... 16

غلظت دزكسي نوكلوئيك اسيدتري فسفات ها (dNTPs)و.......................................... 18

غلظت آنريم DNAپلي مراز (Taq DNA polymerase)و................................................ 21

انتخاب و طراحي پرايمرها (Designing PCR programs)و............................................ 22

انتخاب برنامه هاي دمايي و زماني (Choosing PCR programs)PCRو........................... 23

دماي شروع واسرشته گي براي DNAالگو............................................................... 24

دما و زمان واسرشتگي در طول واكنش (Denaturation step during cycling)و................ 25

زمان و دماي اتصال پرايمرها به رشته الگو (annealing temperature)و.......................... 26

زمان و دماي براي طويل شدن پرايمرها (Primer extension)و...................................... 27

تعداد دورها (Cycle number)و.............................................................................. 28

برنامه طويل سازي نهايي (Final extension)و......................................................... 31

كيفيت DNAالگو (quality of template)و................................................................. 32

نوع آنزيم DNAپلي مراز....................................................................................... 33

حجم واكنش (reaction volume)و......................................................................... 34

اضافه شونده‌ها (sample handing)و...................................................................... 35

برداشت و سمپل كردن واكنش‌گرها (sample handling)و........................................... 37

مسئله‌ي آلودگي در واكنش PCRو......................................................................... 38

PHبافرهاي مورد استفاده در واكنش PCRو.............................................................. 40

تكنيك مورد استفاده در واكنش PCRو..................................................................... 40

Touch down PCRو............................................................................................ 40

Hot star PCRو.................................................................................................. 41

Booster PCRو................................................................................................... 42

Nested PCRو.................................................................................................... 43

كارايي ترموسايگلر............................................................................................. 44

جدول1:يك روش مطلوب براي واكنش PCRو............................................................. 45

جدول2:يك روش پيشنهادي براي تغيير همزمان يك يا چند واكنشگر براي پيدا كردن بهترين

شرايط يك واكنش PCRجديد................................................................................. 46

جدول3:كنترل هاي مناسب براي انجام واكنش PCRو................................................. 48

جدول4:راهنماي عيب يابي................................................................................. 49

منابع.............................................................................................................. 61